ECTS - University of Pisa
| Modules | Area | Type | Hours | Teacher(s) | |
| ADE - MESSA A PUNTO E VALUTAZIONE DI TECNICHE MOLECOLARI QUALI-QUANTITATIVE DI DETERMINAZIONE DI SEQUENZE GENICHE (RT-PCR E DIRECT SEQUENCING) | NN | LEZIONI | 16 |
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L’ADE si pone come obiettivo di introdurre lo studente alle tecniche di biologia molecolare, con particolare riferimento al loro uso in ambito virologico. Si prefigge quindi di far acquisire allo studente le conoscenze e le competenze di base per l’effettuazione di test semplici test di biologia molecolare, quali estrazione ed amplificazione degli acidi nucleici
Durante l'ADE verranno verrà effettuata periodicamente una revisione critica degli argomenti trattati
Sviluppare la manualità base per processare un campione ai fini dell'effettuazione di procolli base (estrazione e amplificazione di acido nucleico, RNA e DNA)
Durante l'ADE verranno effettuate prova pratiche in laboratorio applicando protocolli precedentemente discussi
Lo studente dovrebbe acquisire le conoscenze utili:
Le lezioni teoriche saranno intervallate da momenti di discussione degli argomenti risultati più complessi
Durante la parte pratica verrà verificatà l'acqusizione della corretta manualità
Le conoscenze (teoriche e pratiche) acquisite durante il corso di laurea
Lezioni frontali con supporto di presentazioni (diapositive)
Attività pratica in laboratorio
Modalità telematica per trasferimento di materiale didattico ed eventuale proposta da parte dello studente di approfondimenti teorici o pratici
• Synergy between clinic and laboratory to understand the natural history of viral infections and diseases
• Basic molecular biology techniques for the study of nucleic acids: description of the hybridization technique with analysis of critical processes. Examples of application in the virological field
• Techniques for the quantitative determination of nucleic acids: from hybridization on solid support or in liquid phase to signal or target amplification.
• A brief history of the discovery of PCR. Principles behind the PCR. Real time PCR: specificity and operational processes. Absolute quantization vs relative quantization. Droplet Digital PCR.
• Sequencing: manual and automated Sanger method. NGS: description of the different technological platforms. Practical application of sequencing methods with particular attention to the meaning of the different sensitivity thresholds and quantization capabilities
• Techniques for the study of Single Nucleotide Polymorphisms.
• MicroRNA: critical for the development of quantization techniques on serum / plasma or on tissue. HBsAg and miRNA
• Description of cloning techniques. Application of molecular biology techniques for the study of HBV biology and for the characterization of the carrier of infection
• Sharing and discussion of nucleic acid extraction and amplification protocols: qualitative PCR (HBV) and nested PCR (HDV) procedure
• Sharing and discussion of nucleic acid amplification protocols with real time PCR and characterization of genetic variability
Articoli relativi ai singoli argomenti trattati
Articles relating to the individual topics covered
Prova teorico/pratica: consiste nell'effettuazione di un test di biologia molecolare (estrazione ed amplifciazione di acido nucleico, RNA o DNA).
Durnate la revisione critica della procedura effettuata verranno discussi gli aspetti terorici ad essa correlati
Theoretical / practical test: consists in carrying out a molecular biology test (extraction and amplification of nucleic acid, RNA or DNA).
After the critical review of the procedure carried out, the related issues will be discussed
