ECTS - University of Pisa
Al termine del corso lo studente avrà acquisito conoscenze in merito agli strumenti e le metodologie principalmente utilizzati per lo studio di preparati biologici.
Gli argomenti affrontati durante le lezioni frontali e le esercitazioni pratiche saranno utilizzati per accertare l’acquisizione da parte dello studente degli obiettivi stabiliti.
Al termine del corso:
Lo studente saprà individuare limitazioni e punti di forza dei vari metodi di analisi per campioni biologici
Conoscenze di biologia animale e biochimica.
Durante il corso saranno trattate dal punto di vista teorico/pratico le metodiche comunemente impiegate nel laboratorio biologico per l'analisi di:
Programma Dettagliato
Lezioni Teoriche: 2CFU (14 ore = 7 lezioni frontali di 2 ore)
Argomenti:
-Approccio morfologico/strutturale per lo studio dei campioni biologici: strumenti per l’analisi morfologica; vari tipi di microscopi; fasi per la preparazione di un campione istologico; vari tipi di colorazioni istologiche; principi dell’immunoistochimica.
-Approccio biochimico/funzionale per lo studio dei campioni biologici: frazionamento cellulare e subcellulare mediante centrifugazione differenziale; separazione di proteine mediante metodi cromatografici e elettroforetici; analisi WB. Elettroforesi delle proteine plasmatiche.
-Colture Cellulari: usi sperimentali; tipi di colture; linee a vita finita e continue; banche cellulari; curva di crescita; subcoltivazione; metodi per la conta cellulare; metodica per la crioconservazione e per lo scongelamento; equipaggiamento essenziale per la coltivazione cellulare; classificazione di agenti biologici sulla base del grado di pericolosità per l’uomo; caratteristiche dei terreni di coltura; contaminanti di colture cellulari e strategie per contrastarne la crescita.
-Metodiche di biologia molecolare: clonaggio, trasfezione transiente e stabile; tecniche comunemente impiegate per l'estrazione degli acidi nucleici e loro quantificazione spettrofotometrica. Analisi dell'espressione genica: RT-PCR, real time RT-PCR.
Esercitazioni Pratiche: 1CFU (12 ore = 3 esercitazioni di 4 ore)
- Metodi indiretti per la quantificazione di proteine totali: metodo del biureto, di Bradford, di Lowry, e dell'acido bicinconico. Costruzione della retta di taratura (albumina bovina) mediante l'uso del metodo di Bradford e del biureto. Determinazione della concentrazione proteica incognita di un preparato biologico (omogenato di membrane derivanti da tessuto animale). Utilizzo dello spettrofotometro e della centrifuga. Separazione di macromolecole per gel d’esclusione, immunodosaggio ELISA.
Il materiale didattico, in formato elettronico, sarà fornito dai docenti a seguito delle ore di lezione frontale e di laboratorio.
Al fine di ottimizzare la preparazione dei contenuti oggetto del corso, gli studenti che non frequenteranno le lezioni e le esercitazioni potranno contattare i docenti.
L'esame è composto di una prova scritta.
La prova verterà sugli argomenti affrontati durante il corso. Tale prova servirà a verificare la capacità dello studente di individuare lo strumento più adatto all'analisi di un dato campione biologico, la capacità di illustrare i principi di funzionamento dello strumento, di riconoscere e interpretare il risultato dell'analisi.
