ECTS - University of Pisa
Conoscenza di
Students are expected to acquire: knowledge of
Le conoscenze dello studente e la sua abilità di esporre i principali argomenti presentati durante il corso impiegando la terminologia corretta ed appropriata sarà valutata attraverso l'esame orale finale.
The student's ability to explain the main topics presented during the course using the correct and appropriate terminology will be assessed.
Methods:
Saper effettuare
Students are expected to acquire: some ability to perform
La capacità dello studente di utilizzare le tecniche di base impiegate nella ricerca biochimica sarà valutata tramite la presentazione in sede di esame di una relazione scritta avente per oggetto l'attività di laboratorio svolta.
The student's ability to perform basic techniques used in biochemical research will be assessed.
Methods:
Lo studente potrà acquisire:
Matematica, Chimica generale, Chimica Organica, Fisica, Biologia, Biochimica
Mathematics, General Chemistry, Organic Chemistry, Physics, Biology, Biochemistry
Metodi di insegnamento:
Il corso comprende sedici ore di laboratorio. Durante quattro ore di laboratorio gli studenti sono posti di fronte alla simulazione al computer della purificazione di proteine. Durante le restanti ore di laboratorio gli studenti affrontano un passaggio di purificazione di un enzima e imparano a misurare l'attività enzimatica e la concentrazione di proteine e ad eseguire un'elettroforesi.
Frequenza alle lezioni: consigliata
Frequenza al laboratorio: obbligatoria
Teaching methods:
Delivery: face to face
The course includes sixteen hours of laboratory. During four hours of the laboratory the students will be presented with a computer assisted simulation of the purification of enzymes and will learn the strategies for the purification of proteins. During the remaining hours of laboratory the student will be presented with a purification step of an enzyme and will learn to measure enzyme activity and protein concentration and to perform SDS-PAGE.
Attendance to Lectures: Advised
Attendance to Laboratory: Mandatory
La centrifugazione: Principi fondamentali della centrifugazione. Principali tipi di centrifugazione. Le centrifughe.
I sistemi cromatografici: Principi fondamentali della cromatografia. Cromatografia di ripartizione liquido-liquido: cromatografia su carta e su strato sottile. Cromatografia per esclusione molecolare. Cromatografia per scambio ionico. Cromatografia di affinità. Cromatografia liquida ad alta pressione (HPLC).
Elettroforesi: Concetti fondamentali della teoria dell'elettroforesi. Elettroforesi a fronte mobile (cenni) ed elettroforesi zonale. Elettroforesi discontinua. Elettroforesi in presenza di sodio dodecilsolfato. Isoelectrofocusing. Elettroforesi bidimensionale. Elettroforesi capillare.
Spettrofotometria: Principi fondamentali della spettrofotometria. La legge di Lambert-Beer. Gli spettrofotometri. Applicazioni della spettrofotometria di assorbimento: determinazione quantitativa di un composto mediante l'uso dello spettrofotometro; curve di taratura; dosaggi spettrofotometrici di enzimi diretti ed accoppiati. Cenni di spettrofluorimetria.
Tecniche radiochimiche: Principi fondamentali. Apparecchi per la misurazione della radioattività. Misura della radioattività.
Tecniche immunochimiche: Concetti di base. Saggio radioimmunologico (RIA). Saggio immunoenzimatico (ELISA). Immunodosaggi mediante fluorescenza.
Purificazione delle proteine: Preparazione di un estratto proteico. Dialisi. Ultrafiltrazione. Metodi di precipitazione delle proteine. Strategie di purificazione delle proteine.
Centrifugation: basic principles. Main types of centrifugation. The centrifuges. Principles of chromatography. Thin layer chromatography. Gel filtration. Ion exchange chromatography. Affinity chromatography. High performance liquid chromatography. Basic concepts of electrophoresis. Zonal electrophoresis. Disc electrophoresis. SDS-PAGE. Isoelectrofocusing. Two-dimensional electrophoresis. Capillary electrophoresis. Principles of spectrophotometry. The Lambert-Beer law. Spectrophotometers. Applications of absorption spectrophotometry: quantitative determination of a compound, enzyme assays. Elements of spectrofluorimetry. Radiochemical techniques. Measurement of radioactivity. Equipments for radiochemical measurements. Immunochemical techniques. Radioimmunoassay (RIA). Immunosorbent assay (ELISA). Fluorescence immunoassays. Protein purification: preparation of a protein extract. Dialysis. Ultrafiltration. Methods of protein precipitation. Strategies for protein purification.
Testi di riferimento
“Metodologie Biochimiche” di M.C Bonaccorsi di Patti, R. Contestabile e M.L. Di Salvo, Casa Editrice Ambrosiana, Edizione 2012 o seguenti
oppure
“Principi di Metodologia Biochimica” di C. De Marco e C. Cini, Piccin Nuova Libraria, Edizione 2009 o seguenti
oppure
“Principles and Techniques of Practical Biochemistry” di K. Wilson e J. Walker, Cambridge University Press, fifth edition, 2000 o seguenti
Altro
Lucidi delle lezioni
Recommended reading includes one of the following works: “Metodologie Biochimiche” di M.C Bonaccorsi di Patti, R. Contestabile e M.L. Di Salvo, Casa Editrice Ambrosiana, 2012 (or following) edition “Principi di Metodologia Biochimica” di C. De Marco e C. Cini, Piccin Nuova Libraria, 2009 (or following) edition “Metodologia Biochimica” di K. Wilson e J. Walker, Raffaello Cortina Editore, 1994 (or following) edition “Principles and Techniques of Practical Biochemistry” di K. Wilson e J. Walker, fifth (or following) edition, 2000, Cambridge University Press. Other readings: “Physical Biochemistry” di D. Freifelder, Freeman & Co, 1982 (or following) edition “The tools of biochemistry” di T.G. Cooper, John Wiley & Sons, 1977 (or following) edition “Protein Purification” di R.K. Scopes, Springer-Verlag, 1987 (or following) edition
Esame orale finale e verifica (relazione scritta) per il Laboratorio
Final oral exam and laboratory report
Commissione d'esame
Presidente: Mario Cappiello
Presidente supplente: Francesco Balestri
Altri membri: Antonella Del Corso, Giovanni Signore, Roberta Moschini, Simone Allegrini, Francesca Felice
