Modules | Area | Type | Hours | Teacher(s) | |
PRINCIPI DI BIOLOGIA MOLECOLARE | BIO/11 | LEZIONI | 50 |
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Al termine del Corso lo studente avrà acquisito conoscenze di base sulla biologia a livello molecolare e in particolare sulla struttura e metabolismo delle macromolecole informazionali, sulla struttura del genoma, nonchè sui processi di regolazione della trascrizione geneica e sulle modifiche posttrascrizionali. Inoltre lo studente acquisirà competenze su tecniche di biologia molecolare tra cui metodiche di estrazione, purificazione e analisi degli acidi nucleici, tecniche per lo studio di espressione di geni e polimorfismi nonchè tecniche per lo studio a livello molecolare del metabolismo cellulare.
La verifica delle conoscenze verrà effettuata tramite prove in itinere e attraverso la prova di esame finale. Inoltre il docente verificherà l'apprendimento degli obiettivi intermedi durante lo svolgimento del Corso attraverso un dialogo diretto con gli studenti sugli argomenti trattati a lezione.
Methods:
Capacità di utilizzare la conoscenze di base di biologia molecolare acquisite durtante il Corso per affrontare criticamente situazioni sperimentali proposte durante le esercitazioni.
Durante le lezioni sarà valutata la capacita' degli studenti di acquisire criticamente le nozioni esposte dal docente. Durante gli esami saranno valutate le capacita' dello studente di rispondere in maniera sintetica e mirata alle domande proposte che potranno essere articolate sia come domande a risposta multipla che come domande aperte.
Lo studente dovrà partecipare alle lezioni frontali in modo attivo con osservazioni e domande.
La partecipazione dello studente alla lezione verrà valutata stimolando il dialogo diretto docente-studente e stimolando lo studente a ragionare criticamente sulle problematiche affrontare durante la lezione.
Conoscenze di Biologia animale e conoscenze di base di Chimica organica.
Si consiglia allo studente di elaborare e apprendere gradualmente i concetti esposti a lezione durante l'arco temporale del semestre usufruendo sia del materiale didattico elettronico fornito dal docente che dei libri di testo consigliati.
Delivery: face to face
Learning activities:
Attendance: Mandatory
Teaching methods:
Principi Biologia Molecolare
CTF
Introduzione al corso: modalità di svolgimento, esami e testi consigliati
-Principi di base di biologia molecolare: cenni su esperimenti chiave che portarono alla scoperta del DNA come molecola dell'informazione. Richiami alla struttura di proteine e acidi nucleici. Il dogma centrale della biologia molecolare.
-Chimica degli acidi nucleici; basi azotate e le loro forme tautomeriche, zuccheri, nucleosidi e nucleotidi. Struttura e topologia del DNA. Proprietà del DNA in soluzione: denaturazione/rinaturazione, effetto ipercromico. RNA e le sue strutture, differenze strutturali e funzionali tra DNA e RNA.
-La complessità dei genomi: grandezza e densità genica. I geni codificanti proteine. Differenze tra geni procariotici ed eucariotici. Caratteristiche delle sequenze genomiche (sequenze uniche, ripetute e polimorfiche).
-Replicazione del DNA: chimica della sintesi del DNA, meccanismo molecolare di azione della DNA polimerasi. Enzimologia della replicazione: le DNA elicasi, le SSB, le topoisomerasi e le DNA sliding clamp. Le DNA polimerasi nei batteri e negli eucarioti. La regolazione dell'inizio della replicazione in procarioti e eucarioti. Il problema della terminazione dei cromosomi lineari: telomerasi e telomeri.
- Mutabilità e riparazione del DNA: danno spontaneo e danno indotto da agenti chimici e radiazioni. Sistemi di riparazione.
-Ricombinazione omologa in procarioti ed eucarioti: meccanismo molecolare. Ricojmbinazione sito specifica: meccanismo di azione delle ricombinasi.
-Trasposizione: struttura di trasposoni a DNA e retrotrasposoni e meccanismi molecolari di traspozizione.
- Espressione del genoma: RNA polimerasi e ciclo della trascrizione. Cenni alla trascrizione nei procarioti e eucarioti. Meccanismo molecolare di azione della RNA polimerasi I e III.
-Modificazioni post-trascrizionali: la chimica dello splicing dell'RNA, vie di splicing, varianti di splicing, splicing alternativo e rimescolamento degli esoni, capping e poliadenilazione del mRNA.
-La regolazione dell’espressione genica in procarioti e eucarioti: principi di regolazione trascrizionale in procarioti ed eucarioti, integrazione del segnale e controllo combinatorio. Repressori trascrizionali. RNA regolatori. Malattie associate ad alterazioni dei processi di regolazione post-trascrizionale. Operone Lac e batteriofago lambda. Azione di attivatori e repressori nel controllo della trascrizione in cellule eucariotiche.
Tecniche di biologia molecolare
-Colture cellulari.
-Metodi di estrazione e purificazione degli acidi nucleici e tecniche spettrofotomeriche per l’analisi del DNA in soluzione
-Analisi degli acidi nucleici mediante elettroforesi su gel di agarosio
-Reazione a catena della polimerasi (RT-PCR e real-time PCR).
-Analisi dei polimorfismi mediante PCR e Southern Blott.
-Tecniche di sequenziamento del DNA: metodo di terminazione della catena (Sanger), pirosequenziamento e piattaforma 454.
-Principi di citofluorimetria a flusso
Esercitazioni pratiche di laboratorio:
-Colture cellulari
-Estrazione di mRNA da cellula
-Analisi di acidi nucleici mediante elettroforesi su gel agarosio
-Retrotrascizione mRNA-cDNA
-Analisi di espressione genica mediante Real time PCR semiquantitativa.
-Analisi del ciclo cellulare e del processo apoptotico mediante Muse Cell Analyzer
Libri di testo consigliati:
-Biologia Molecolare. Amaldi, Benedetti, Pesole e Plevani. Casa editrice Ambrosiano. Ed. 2014.
-Biologia Molecolare del gene. Watson, Baker. Casa Editrice Zanichelli. Ed. 2014
-Fondamenti di Biologia Molecolare L.A. Allison ZANICHELLI
-L’essenziale di Biologia Molecolare della Cellula B. Alberts et al ZANICHELLI
Il docente inoltre fornirà alla fine di ogni lezione un pacchetto di slides che potranno servire come orientamento allo studio degli argomenti trattati.
Per i non frequentanti si consiglia di consultare durante lo svolgimento del corso il registro delle lezioni disponibile su Inimap al fine di identificare gli argomenti specifici trattati a lezione.
L’esame finale è costituito da una prova “in itinere” svolta alla fine del corso. Per gli studenti che abbiano sostenuto positivamente tale prova, l’esame di profitto sarà costituito da uno scrutinio condotto dalla commissione sulla base dei risultati ottenuti. Altrimenti l’esame sarà svolto come prova scritta nelle date di esame prestabilite.